Säker autoklavering av glasflaskor

Av DWK Life Sciences

En autoklav är en specialiserad utrustning som är framtagen för att leverera en fysisk metod för desinfektion och sterilisering. Processen realiseras genom en kombination av ånga, högt tryck och tid. Ånga är klart effektivare att överföra värmeenergi än torr luft, och kan sterilisera en last vid 121 °C på bara 15 minuter.

De flesta glasflaskor för laboratoriebruk kan autoklaveras. Emellertid måste man beakta vissa skillnader mellan de typer av glasprodukter som används på laboratoriet, samt bästa arbetsmetoder i genomförandet av en autoklavcykel.

I den artikeln besvarar vi vanliga frågor så att du kan autoklavera glasflaskor på ett säkert sätt.

1) Är det säkert att autoklavera alla typer av laboratorieglasflaskor?

Innan man gör det, måste man kontrollera lämpligheten hos olika glas- och flasktyper. Flaskor i borosilikatglas är säkra att autoklavera eftersom materialet har mycket god motståndskraft mot värmechock. Det råder en mycket högre risk för brott vid autoklavering av glasflaskor av soda eller flintglas, och även om det fortfarande är möjligt att autoklavera flaskor av denna typ har materialet inte samma säkerhetsmarginal.

Plastbelagda laboratorieflaskor kan också autoklaveras på ett säkert sätt, men beläggningsmaterialet utsätts för hydrolys genom ångan under autoklavprocessen; det innebär att de i typfallet kan klara färre autoklavcykler än obelagda glasflaskor.

Man bör inte fylla glasbehållare över 75% av den nominella kapaciteten, eftersom detta låter vätskan expandera och ev. skumma, vilket förhindrar översvämning. Den säkra fyllningskapaciteten har också att göra med vätskans egenskaper. Glasflaskor som innehåller vatten eller vattenhaltiga buffertar kan fyllas upp till behållarens nominella fyllningslinje. Flaskor som används för sterilisering av agarbaserade medier skall fyllas till endast 50% av behållarkapaciteten.

2) Hur skall laboratorieflaskor lastas i autoklaven?

När man använder en autoklav bör personlig skyddsutrustning användas. Hit hör komplett ögon-/ansiktsskydd, skor med sluten tå, samt värmeresistenta handskar för borttagning av varor, i synnerhet heta glasprodukter.

Undvik att fylla autoklaven alltför mycket, så att ångan kan cirkulera och leverera en effektiv steriliseringsprocess. Säkerställ också att flaskor har diskats innan de placeras i autoklaven. Det förhindrar att kontaminerande ämnen bränns fast på glasflaskans väggar.

Stora och tunga flaskor, t.ex. 20-L-flaskor, bör också ha en liten mängd destillerat vatten (WFI eller renat) invändigt som hjälper dem att generera ånga när de steriliseras torra (tomma) i en autoklav.

3) Hur ångsteriliserar man glasflaskor med skruvlock?

Vid sterilisering eller autoklavering av flaskor måste skruvlocket vara löst åtskruvat med max. ett varv. I ett slutet kärl expanerar innehållet vilket genererar en stor tryckskillnad (mer än 4 bar absolut) vilket i sin tur kan leda till explosion. Dessutom kan lock som inte är tillräckligt uppskruvade skapa ett vakuum i flaskan under kylningsfasen. Om flaskorna inte är adekvat ventilerade kan vätskan i dem inte koka under återkylningsfasen, och förblir då överhetta under en längre tid. Förslut eller flytta aldrig behållare med överhettade vätskor. Om locket lämnas löst (1/2 varv) råder det ingen tryckskillnad mellan ångan inne i autoklaven och flaskans innanmäte.

Flaskor får autoklaveras säkert med tillslutna lock om ångautoklaven har stödtryckskompensering.

I traditionella autoklaver (utan tryckkompensering) är ett membranlock med ventilation ett säkrare, bekvämt alternativ. En tryckutjämning i två faser äger rum genom ePTFE-membranet, 0.2 mikron tjockt, vilket tillåtet att locket förblir stängt för att minska risken för kontaminering efter avslutad autoklavprocess. Membranlock med ventilation skall inte användas till flaskor större än 3500 ml.

För GMP-verksamhet, medicinska tillämpningar eller för flaskor som rummer 5 liter eller mer, kan användningen av ett kontaktlock med enkelport monterat med ett sterilt ventilationsfilter vara ett lämpligare alternativ än membranlocken. Exempel: ett lock i GL 45 rostfritt stål med enkelport kan användas med en validerad farma-klassificerad 50mm skiva, 0.2 mikron, steril luft, eller lockfilter. Detta alternativ rekommenderas särskilt för större flaskor med mer än 2 liter.

4) Skall jag täcka över flasköppningarna med aluminumfolie före autoklavering?

Denna åtgärd förekommer på många forskningslaboratorier, men att täcka över öppningarna i glasbehållare minskar sannolikheten för att godset blir korrekt steriliserat. Folien skall läggas på löst, så att ångan kan tränga in, och den erbjuder inget skydd mot kontaminering efter sterilisering.

5) Hur lång skall autoklavcykeln vara?

Ångsterilisering rekommenderas vid + 121, 126 eller + 134 °C, beroende på tillämpning. Som en vägledning säger den brittiska standarden BS EN 285:1997 8.3.1 följande: "The holding time shall be not less than 15 min, 10 min and 3 min for sterilization temperatures of 121 °C, 126 °C and 134 °C respectively.” (i översättning: hålltiden skall inte vara kortare än 15 min, 10 min och 3 min för steriliseringstemperaturer på 121 °C, 126 °C resp. 134 °C).

Det är bra att använda antingen en biologisk eller en kemisk indikator för att verifiera att autoklaven fungerar korrekt. Om någon indikator slutar fungera måste autoklaven undersökas så att felet kan identifieras och åtgärdas. Det är också av kritisk betydelse att sedan autoklavera godset igen, så att steriliteten säkerställs.

Autoklavtejp kan också placeras på artiklar, varvid markeringarna på tejpen framträder när den kritiska temperaturen uppnås. Men till skillnad från andra metoder, såsom biologiska indikatorer, ger autoklavtejp ingen kvittering av steriliseringen. I stället kan den användas till att identifiera autoklaverade gentemot icke-autoklaverade varor.

Vid tömning av autoklaven måste man gå åt sidan för att hålla ansikte och kropp borta från dörren och ångan. Det är också tillrådligt att öppna dörren och vänta i tio minuter, så att godset kan svalna, om så är möjligt. Låt alltid det autoklaverade godset svalna till rumstemperatur före transport.

6) Hur ofta kan laboratorieflaskor autoklaveras?

Antalet autoklavcykler som en produkt kan exponeras för är avhängigt av den typ av glasflaska som autoklaveras, varvid sodaglasflaskor och plastbelagda flaskor klarar färre autoklavcykler än laboratorieflaskor i obelagt borosilikat 3.3.

Trots att borosilikat 3.3 har ett briljant motstånd mot värmechock, kan dessa flaskor ta skada och bli olämpliga för autoklavering med tiden. Orsaken är att merparten av draghållfastheten hos borosilikatglas sitter i ytans beskaffenhet, och om glaset får repor, t.o.m. på mikroskopnivå, minskar dess styrka i stor utsträckning. Flaskor med repfri yta klarar upprepad tryckbehandling på ett säkert sätt, äldre flaskor inte.

Tyvärr går det inte att förutsäga när en äldre flaska går sönder. DWK Life Sciences rekommenderar därför att man byter ut artiklar rutinmässigt, och att man noggrant granskar varje artikel visuellt före användning med avseende på repor, flisor eller andra defekter. Om man upptäcker sådana skador skall produkten tas ur bruk och kastas omedelbart.